目前,对导致SARS的冠状病毒及抗体尚没有有效的诊断试验。但可以利用现有的实验及其特性可以发现SARS, 用于诊断试验的样品应适合病毒培养、PCR、抗体检测、免疫荧光实验和/或血清学试验。
为加强对SARS病原的研究和了解,同时为条件成熟时进行诊断试验做准备,WHO推荐临床医生连续采集SARS病人的各种实验样本,并加以储藏。首例病人样本采集对于以前从未报告SARS的国家十分重要。临床资料、接触史与实验室结果可以使我们更好了解病毒的致病和变异机制。
各种情况下采样概要:
根据WHO实验网络提供的实践经验,上呼吸道样本适用于病毒检测(病毒分离与RNA检测),多部位采样将提高检测率。
样本 类别 | 方法 | 储存、运输或 装载容器 | 采样时间 | 用途 |
鼻咽 | 吸入物: 是呼吸道病毒 的检测样本 | 消毒瓶 | 适合于疾病 各个过程 | 病毒培养 |
便携式消毒容器 | 特别是疾病 早期 |
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4℃保存 |
| PCR | ||
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鼻咽或 口咽 | 拭子:只能使 用消毒的达 可纶或人造纤维 的塑料杆进行 采样
| 便携式消毒容器 | 适合于疾病 各个过程 | 电子显微镜 |
| 特别是疾病早期 |
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4℃保存 |
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气管 | 吸入物 | 半离心:细胞 用福尔马林 固定,组织液 保存在消毒瓶 中。用冰块 储运;已 固定细胞 在室温下储存, 未固定细胞 则冷冻 | 出现相应的临床 体征:插管、 严重肺病或 出现胸水 对疾病早期和 发展期均适合
| 标准培养
病毒培养
PCR
电子显微镜
在染色或未染色的 镜片: 免疫荧光和 分子生物学 |
肺泡 清洗 |
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胸膜液 | 胸膜穿刺 | |||
尿 | 用消毒容器收集 中段尿 | 离心,收集沉淀 物,装入2-3ml 消毒容器或 磷酸盐缓 冲液中 | 急性期 | 抗原检测 |
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病毒培养 | ||||
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PCR | ||||
粪便 |
| 采样10-50ml 装入瓶中, 用冰块保存 | 任何阶段 | 病毒培养 |
发现10天时的 最好样本 |
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| PCR | |||
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| 电子显微镜 | |||
结膜 | 拭子:只能使用 消毒的达可纶或 人造纤维的塑料 杆进行采样 | 消毒的病毒 培养皿 | 尽可能在疾病 早期 | 病毒培养 |
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用冰块保存 | PCR | |||
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| 电子显微镜 | |||
血清 |
| 收集>= 200 l,冷冻保存 | 急性期(7天 以内) | 特殊抗体检测(IgM, IgA,IgG) |
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康复期:3-4周 后 | ||||
全血 |
| 抗凝血试管 | 任何阶段 |
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用冰块保存 | ||||
血液 |
| 标准血培养瓶 |
| 标准培养 |
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PCR | ||||
组织 (活组 织, 尸解) | 肺,上呼吸道 | 带病毒培养液 的消毒容器: –70°C保存 |
| 电子显微镜 |
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免疫荧光实验和分子 生物学 | ||||
| 主要器官 | 福尔马林或 石蜡 固定 |
| 电子显微镜 |
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室温保存 |
呼吸道样本采样程序
a. 鼻咽清洗物或吸入物
这是进行呼吸道病毒检验采样方法之一。让病人坐下,头稍向后仰。先向一侧鼻腔内注入1-1.5ml的无菌盐水(PH7.0)。将装有2-3ml的盐水的导管与上腭平行插入鼻腔,让病人呼出鼻咽分泌物;另一侧鼻腔重复上述步骤。将所收集的样本装入消毒瓶中。
b. 鼻咽拭子采集
与上腭平行,将拭子插入鼻腔,放置一会吸收分泌物。两侧鼻腔均应采样。
c. 口咽拭子的采集
拭抹双侧后咽部和扁桃体区域,避免触及舌部。
d. 下呼吸道的采样(见上表)
安全性:
操作、储藏和运输过程应按照WHO的SARS样本采集实验室安全操作规范执行。医务人员对SARS病人或疑似病人采样时,应做好个人防护:戴口罩(高滤过性:符合N,R,P95/99/100,FFP 2/3标准),护目镜,手套和隔离衣。
为避免外溢,试管等采样容器封口,并贴上生物危险标签。按照WHO的SARS样本采集实验室安全操作规范每个样本应编号和注明采样日期。
需运输的,按照WHO的SARS样本采集实验室安全操作规范采用合适的包装,并进行标注。