SARS诊断试验的采样

来源:公共卫生突发事件咨询服务与研究中心  作者:  发布时间:2003-05-11  查看次数:2130

   

    目前,对导致SARS的冠状病毒及抗体尚没有有效的诊断试验。但可以利用现有的实验及其特性可以发现SARS, 用于诊断试验的样品应适合病毒培养、PCR、抗体检测、免疫荧光实验和/或血清学试验。
   为加强对SARS病原的研究和了解,同时为条件成熟时进行诊断试验做准备,WHO推荐临床医生连续采集SARS病人的各种实验样本,并加以储藏。首例病人样本采集对于以前从未报告SARS的国家十分重要。临床资料、接触史与实验室结果可以使我们更好了解病毒的致病和变异机制。

各种情况下采样概要:
    根据WHO实验网络提供的实践经验,上呼吸道样本适用于病毒检测(病毒分离与RNA检测),多部位采样将提高检测率。

样本

类别

方法

储存、运输或

装载容器

采样时间

用途

鼻咽

吸入物:

是呼吸道病毒

的检测样本

消毒瓶

适合于疾病

各个过程

病毒培养

便携式消毒容器

特别是疾病

早期

 

4℃保存

 

PCR

 

 

 

鼻咽或

口咽

拭子:只能使

用消毒的达

可纶或人造纤维

的塑料杆进行

采样

 

便携式消毒容器

适合于疾病

各个过程

电子显微镜

 

特别是疾病早期

 

4℃保存

 

 

气管

吸入物

半离心:细胞

用福尔马林

固定,组织液

保存在消毒瓶

中。用冰块

储运;已

固定细胞

在室温下储存,

未固定细胞

则冷冻

出现相应的临床

体征:插管、

严重肺病或

出现胸水

对疾病早期和

发展期均适合

 

 

 

 

 

标准培养

 

病毒培养

 

PCR

 

电子显微镜

  

在染色或未染色的

镜片: 免疫荧光和

分子生物学

肺泡

清洗

 

胸膜液

 胸膜穿刺

尿

用消毒容器收集

中段尿

离心,收集沉淀

物,装入2-3ml

消毒容器或

磷酸盐缓

冲液中

急性期

抗原检测

 

病毒培养

 

PCR

粪便

 

采样10-50ml

装入瓶中,

用冰块保存

任何阶段

病毒培养

发现10天时的

最好样本

 

 

PCR

 

 

 

电子显微镜

结膜

拭子:只能使用

消毒的达可纶或

人造纤维的塑料

杆进行采样

消毒的病毒

培养皿

尽可能在疾病

早期

病毒培养

 

 

用冰块保存

PCR

 

 

 

电子显微镜

血清

 

收集>= 200

l,冷冻保存

急性期(7天

以内)

特殊抗体检测(IgM,

IgA,IgG)

 

康复期:3-4周

全血

 

抗凝血试管

任何阶段

 

 

用冰块保存

血液

 

标准血培养瓶

 

标准培养

 

PCR

组织

(活组

织,

尸解)

肺,上呼吸道

带病毒培养液

的消毒容器:

70°C保存

 

电子显微镜

 

 免疫荧光实验和分子

生物学

 

主要器官

福尔马林或

石蜡

固定

 

电子显微镜

 

室温保存

呼吸道样本采样程序
a. 鼻咽清洗物或吸入物 
    这是进行呼吸道病毒检验采样方法之一。让病人坐下,头稍向后仰。先向一侧鼻腔内注入1-1.5ml的无菌盐水(PH7.0)。将装有2-3ml的盐水的导管与上腭平行插入鼻腔,让病人呼出鼻咽分泌物;另一侧鼻腔重复上述步骤。将所收集的样本装入消毒瓶中。

b. 鼻咽拭子采集
    与上腭平行,将拭子插入鼻腔,放置一会吸收分泌物。两侧鼻腔均应采样。

c. 口咽拭子的采集
    拭抹双侧后咽部和扁桃体区域,避免触及舌部。

d. 下呼吸道的采样(见上表)

安全性:
    操作、储藏和运输过程应按照WHO的SARS样本采集实验室安全操作规范执行。医务人员对SARS病人或疑似病人采样时,应做好个人防护:戴口罩(高滤过性:符合N,R,P95/99/100,FFP 2/3标准),护目镜,手套和隔离衣。
    为避免外溢,试管等采样容器封口,并贴上生物危险标签。按照WHO的SARS样本采集实验室安全操作规范每个样本应编号和注明采样日期。
    需运输的,按照WHO的SARS样本采集实验室安全操作规范采用合适的包装,并进行标注。