摘 要:近年来H5N1 亚型禽流感病毒(AIV) 神经氨酸酶(NA) 茎部15～20 个氨基酸的自发缺失时有报道,突变对于AIV 生物学特性的影响还没有得到系统研究。应用反向遗传操作技术,拯救获得5 株具有不同NA 茎部长度的H5N1PPR8 重组AIV。重组病毒的内部基因和血凝素(HA) 基因来源相同,NA 基因来源不同,并在NA 茎部进行20个氨基酸的删除或添加突变。通过研究其生物学特性发现,5 株重组病毒在SPF 鸡胚中繁殖良好,其EID50 、MDT和平均病毒滴度相似;NA 茎部长短影响病毒的解凝能力,长茎病毒红细胞解脱能力比短茎病毒强;NA 茎部15 或20个氨基酸删除突变提高了重组病毒在MDCK细胞上的繁殖能力,短茎病毒释放出的病毒粒子数量是长茎病毒的10～100 倍,释放时间提前6～10h ,短茎病毒在MDCK细胞上形成的空斑也明显比长茎病毒的空斑大。实验结果揭示了AIV NA 茎部氨基酸缺失突变的生物学意义,NA 茎部15 或20 个氨基酸删除突变增强了AIV 的细胞适应性,可能与现阶段H5N1 亚型AIV 宿主范围进一步扩大有关。利用反向遗传技术成功拯救了5 株H5N1PPR8 重组流感病毒,为流感病毒基因功能研究和重组疫苗研究建立了技术平台。通过对AIV NA 茎部氨基酸的删除突变提高了病毒在MDCK细胞上的繁殖产量,为流感病毒细胞苗的生产提供了新的思路。
神经氨酸酶茎部氨基酸缺失对H5N1亚型禽流感病毒生物学特性的影响.pdf
