目的应用SuperScipt~(TM)Ⅱ Rnase H-Reverse Transcriptase建库试剂盒建立了流感病毒A单抗杂交瘤细胞cDNA文库。方法取流感病毒A单抗杂交瘤细胞,进行体外培养,提取 mRNA,并将其反转录成cDNA,与EcoRI接头连接后插入pBluescriptⅡ SK(+)XR载体,体外包装后转染到DH10B宿主菌中,进行滴度测试及文库扩增。结果构建的流感病毒A单抗杂交瘤细胞cDNA文库含1.07×106重组子,重组率87.5%,插入片段长度约为500~2000bp。扩增后的文库浓度为3.2×107重组子/μl,将文库稀释到10-6时所产生的噬菌斑密度最为适宜。结论试验结果表明,该库符合标准,所构建的流感病毒A单抗杂交瘤细胞cDNA文库为进一步筛选目的基因、制作基因芯片等提供了有效的工具。
